農(nóng)產(chǎn)品貯藏時(shí)一般都采用低溫貯藏法和化學(xué)藥劑處理法，但是很多熱帶、亞熱帶水果，如香蕉、芒果、荔枝等在低溫下容易出現(xiàn)冷害，不能采用低溫貯藏法進(jìn)行保存，并且低溫貯藏成本高、耗能大、質(zhì)量不穩(wěn)定;化學(xué)藥劑處理能夠很好的實(shí)現(xiàn)果蔬采摘后的保鮮，但是化學(xué)試劑的殘留以及有毒殺菌劑的使用，給人們帶來的食品安全隱患問題，令人望而生畏。近10年來，生物保鮮成為國(guó)內(nèi)外科研工作者研究的重點(diǎn)，利用微生物拮抗菌進(jìn)行保鮮的產(chǎn)品已經(jīng)陸續(xù)上市：Blossom-Protec;CandiFruit;Shemer;Bio-Save;MUSCODORTM等，影響微生物保鮮菌商業(yè)化生產(chǎn)的因素之一是：實(shí)際生產(chǎn)使用中，菌種的退化、在貯藏及惡劣環(huán)境中抗病能力下降。本文詳細(xì)綜述了微生物菌種的保藏方法，降低保鮮拮抗菌在生產(chǎn)、保藏過程中的變異及退化。MVE液氮罐

1傳代保藏

傳代保藏菌種是微生物保存中最常用的方法之一。很多微生物在低溫或者干燥處理時(shí)，會(huì)很快死亡，為了保存菌種的活性，就要定期不斷的進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存。我們所喝的酸奶就是采用這種方式進(jìn)行生產(chǎn)菌種保存的。這種會(huì)產(chǎn)生酸性物質(zhì)的菌種，在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)要在培養(yǎng)基中添加少量的碳酸鈣。傳代培養(yǎng)的過程中，培養(yǎng)的養(yǎng)分不要太豐富，培養(yǎng)溫度也要比孢子最適合的生長(zhǎng)溫度略低。傳代培養(yǎng)保存微生物的方法簡(jiǎn)單易行，只要培養(yǎng)皿就能實(shí)現(xiàn)，不需要特殊的設(shè)備，是目前實(shí)驗(yàn)室各類微生物保藏最常用的方法。但是此法也存在著一些缺點(diǎn)，如培養(yǎng)基容易干枯;菌種管處經(jīng)常被其他雜菌污染發(fā)生霉變;菌種在反復(fù)傳代的過程中發(fā)生基因突變，不能保證優(yōu)良性狀傳遞下來;在傳代的過程中產(chǎn)生的孢子活性越來越弱。MVE液氮罐

2液體石蠟覆蓋保藏

為了傳代保存時(shí)，減少雜菌的侵染，使用液體石蠟進(jìn)行覆蓋加以輔助，就是在斜面培養(yǎng)基上，當(dāng)在最適合的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)出健壯的菌體后，加入已滅菌的液體石蠟油，并將此斜面培養(yǎng)基保藏在低溫條件下。由于培養(yǎng)物表面覆蓋液體石蠟后可隔絕空氣，因此降低了微生物菌體的物質(zhì)代謝，延緩細(xì)胞的衰老，同時(shí)也防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，是一種簡(jiǎn)易的菌種保藏方法。很多產(chǎn)生孢子能力低的絲狀菌都是采用這種方法進(jìn)行保存。這種方法制作方法簡(jiǎn)單，不需要經(jīng)常移種傳代。對(duì)大多數(shù)種類的菌種保藏效果都比較理想。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可保藏2年以上，沒有芽孢的細(xì)菌都可以采用這種方法保藏1年左右，一些很難保藏的菌種如腦膜炎球菌，可以的采用這種方法保存至少3個(gè)月以上。但是采用石蠟覆蓋保藏法的菌種攜帶不方便，保存時(shí)需要大量空間，以保證培養(yǎng)基能直立放置。在取培養(yǎng)物進(jìn)行移種時(shí)，一般要通過火焰灼燒將石蠟融化，這個(gè)過程可能造成培養(yǎng)物與石蠟油飛濺，有安全隱患。

3冷凍干燥保藏

冷凍干燥保藏法為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對(duì)一般生活力強(qiáng)的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用。這種方法適用于菌種長(zhǎng)期保存，一般可保存數(shù)年至十余年。因?yàn)槔鋬龈稍锓ㄊ咕N處于一個(gè)無氧的真空環(huán)境中，微生物不能進(jìn)行正常的新陳代謝，只能處于休眠狀態(tài)。當(dāng)環(huán)境變?yōu)檫m合生長(zhǎng)的適合，才會(huì)繼續(xù)增殖生長(zhǎng)。所以保藏期就比較長(zhǎng)。目前像春雷霉素、頭孢霉素、卡那霉素等抗生素菌種不易產(chǎn)生孢子的絲狀真菌，都是采用冷凍干燥法保存的。另外我國(guó)大多數(shù)生物制品菌種都是采用該法保藏。MVE液氮罐

4液氮超低溫保藏

液氮超低溫保藏法是菌種長(zhǎng)期保藏的最有效最可靠的方法。液超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護(hù)劑的安瓶瓶?jī)?nèi)，將該安瓶瓶放人液氮罐(-196℃)中保藏。由于菌絲體處于-196℃，其代謝降低到完全停止的狀態(tài)。甘油、血清蛋白、二甲基亞砜、聚乙烯氮戊環(huán)、糊精、吐溫80等可用做液氮低溫保藏法的保護(hù)劑，其中甘油在進(jìn)入和游出細(xì)胞時(shí)速度非常緩慢，造成強(qiáng)烈的脫水，從而保護(hù)細(xì)胞，是目前最常用的保護(hù)劑。不同微生物要選擇不同的保護(hù)劑，再通過實(shí)驗(yàn)加以確定保護(hù)劑的濃度，原則上是控制在不足以造成微生物致死的濃度，一般甘油為10%-20%、二甲基亞砜為5%-10%、聚乙烯氮戊環(huán)為0.4mmol/L。

5蒸餾水保藏

蒸餾水保藏菌種的方法普遍的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)微生物、食品微生物和工業(yè)微生物中，如皮膚癬菌、酵母、霉菌、放線菌的保藏，在食用菌金針菇的保藏中也有提到。其方法是：將菌體懸浮于蒸餾水中，即可在室溫下保存數(shù)年，此法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

6結(jié)論

綜上所述，傳代保藏法、液體石蠟覆蓋保藏、冷凍干燥保藏、液氮超低溫保藏、蒸餾水保藏等菌種保藏方法都各有各的優(yōu)點(diǎn)，針對(duì)不同的拮抗菌的特點(diǎn)及保藏目的需要，選擇最好的保藏方法。目前，拮抗菌的保藏的最大問題是：如何保證在生產(chǎn)過程中菌種的穩(wěn)定性，避免生產(chǎn)多代產(chǎn)品后菌種的退化及衰老，尤其是工業(yè)化生產(chǎn)的生物保鮮產(chǎn)品在貨架期間的貯藏。因此，利用拮抗菌保鮮的工廠化產(chǎn)品的貯藏，將是生物保鮮菌保藏研究的一個(gè)重要的部分。MVE液氮罐